本研究采用PSA培養(yǎng)基對(duì)上海地區(qū)的番茄棒孢葉斑病的病原菌進(jìn)行分離、培養(yǎng)及致病性測(cè)定,通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法鑒定病原菌,并對(duì)該病菌的生物學(xué)特性進(jìn)行研究。結(jié)果表明:番茄棒孢葉斑病病原菌菌落呈灰褐色,菌絲質(zhì)地致密、絨毛狀;分生孢子單生或串生,圓柱形或倒棍棒形、頂端鈍圓,基部平截,呈半透明至淺褐色,假隔膜4～10個(gè),直或稍彎曲,基臍加厚,深褐色。結(jié)合病原菌rDNA ITS序列測(cè)定、比對(duì)后,確定該病原為多主棒孢Corynespora cassiicola。該病菌的菌絲生長(zhǎng)最適溫度為25～30℃,最適pH范圍為4～8,產(chǎn)孢的最適溫度約為25℃,最適pH范圍為5～9,麥芽糖和乳糖為碳源的培養(yǎng)基適宜菌絲生長(zhǎng),可溶性淀粉和乳糖溶液中孢子萌發(fā)率最高,光暗交替條件適宜菌絲生長(zhǎng),孢子在水滴中極易萌發(fā)。這是該病在上海地區(qū)的首次報(bào)道。

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圖1 番茄棒孢葉斑病田間發(fā)病癥狀及病原菌形態(tài)特征

菌落在PSA平板上呈灰褐色,菌絲質(zhì)地致密、絨毛狀(圖1b)。分生孢子單生或串生,圓柱形或倒棍棒形、頂端鈍圓,基部平截,呈半透明至淺褐色,假隔膜4～10個(gè),直或稍彎曲,大小(32～189.5)μm×(6～16)μm,基臍加厚,深褐色,寬4～7μm(圖1c、1d),分生孢子梗較粗,....

圖2 菌株SH17-159的rDNA ITS序列

菌株SH17-159的rDNAITS序列經(jīng)PCR擴(kuò)增,得到520bp左右的片段。測(cè)序后,獲得512bp的序列(圖2)。通過NCBIGenBank進(jìn)行BLAST相似性比對(duì),與多主棒孢Corynesporacassiicola(FJ852699、EF198117)的相似性達(dá)....

圖3 菌株SH17-159基于rDNA-ITS序列的系統(tǒng)發(fā)育分析

圖2菌株SH17-159的rDNAITS序列2.4不同條件對(duì)孢子萌發(fā)的影響

圖4 溫度對(duì)多主棒孢孢子萌發(fā)的影響

由圖4可知,多主棒孢分生孢子在溫度為5℃時(shí)不萌發(fā),10～45℃范圍內(nèi)均可萌發(fā)。20～35℃為適宜萌發(fā)溫度范圍,孢子萌發(fā)率超過75%;最適宜溫度為25℃,萌發(fā)率達(dá)85%;低于20℃和高于35℃孢子萌發(fā)受到明顯抑制,當(dāng)溫度為45℃時(shí),萌發(fā)率僅為3%。2.4.2pH對(duì)孢子萌發(fā)的影響

本文編號(hào)：4048023