目的:探討組蛋白去乙酰化酶6在炭黑顆粒誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用。方法:體外培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞（16HBE）,以細(xì)胞空白為對(duì)照組,分別用12.5、25、50、100μg/ml濃度的炭黑顆粒（Printex90）染毒細(xì)胞12、24、36、48 h后,采用Cell Counting Kit-8法（CCK-8）檢測(cè)細(xì)胞活力確定染毒時(shí)間。采用HDAC6siRNA預(yù)處理16HBE細(xì)胞,將實(shí)驗(yàn)分為六組,細(xì)胞空白對(duì)照組、25μg/ml炭黑顆粒組、50μg/ml炭黑顆粒組、HDAC6 siRNA干擾空白組、25μg/ml炭黑顆粒+HDAC6 siRNA干擾組、50μg/ml炭黑顆粒+HDAC6 siRNA干擾組,染毒24 h后,收集染毒細(xì)胞和上清液,采用RT-PCR檢測(cè)HDAC6基因mRNA相對(duì)表達(dá)水平,WB檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)HDAC6、纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白IFT88和自噬體蛋白LC3-Ⅱ等蛋白表達(dá)水平,ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清液中IL-8、IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β1和IL-17A等炎性細(xì)胞因子的釋放量。結(jié)果:（1）在染毒各個(gè)時(shí)間點(diǎn),炭黑顆粒染毒16HBE細(xì)胞后可導(dǎo)致細(xì)胞活力明顯下降,隨... 

【文章來(lái)源】：武漢科技大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮寫(xiě)
摘要
Abstract
第1章 前言
第2章 炭黑顆粒對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞HDAC6、自噬水平及炎癥反應(yīng)的影響
    2.1 材料與方法
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要試劑配制
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.l 不同濃度和時(shí)間的炭黑顆粒對(duì)16HBE細(xì)胞存活率的影響
        2.2.2 炭黑顆粒染毒對(duì)16HBE細(xì)胞內(nèi)HDAC6mRNA表達(dá)的影響
        2.2.3 炭黑顆粒染毒對(duì)16HBE細(xì)胞內(nèi)HDAC6蛋白表達(dá)的影響
        2.2.4 炭黑顆粒染毒對(duì)16HBE細(xì)胞內(nèi)IFT88蛋白表達(dá)的影響
        2.2.5 炭黑顆粒染毒對(duì)16HBE內(nèi)細(xì)胞自噬體蛋白LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)的影響
        2.2.6 炭黑顆粒染毒誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞表達(dá)炎性細(xì)胞因子的水平
    2.3 討論
第3章 HDAC6在炭黑顆粒致人支氣管上皮細(xì)胞自噬及炎癥反應(yīng)中的調(diào)控作用
    3.1 材料與方法
        3.1.1 主要儀器
        3.1.2 主要試劑配制
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 HDAC6siRNA對(duì)炭黑顆粒誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞釋放HDAC6mRNA表達(dá)的影響
        3.2.2 HDAC6siRNA對(duì)炭黑顆粒誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞釋放HDAC6蛋白表達(dá)的影響
        3.2.3 HDAC6siRNA對(duì)炭黑顆粒誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞釋放IFT88蛋白表達(dá)的影響
        3.2.4 HDAC6siRNA對(duì)炭黑顆粒誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞釋放LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)的影響
        3.2.5 HDAC6siRNA對(duì)炭黑顆粒誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞釋放各因子水平的影響
    3.3 討論
第4章 結(jié)論
第5章 結(jié)語(yǔ)與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述：纖毛異常在呼吸道疾病發(fā)生過(guò)程中的作用
    參考文獻(xiàn)
附錄1 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
附錄2 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]PM2.5對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞毒性作用的初步研究[D]. 丁曉潔.南京醫(yī)科大學(xué) 2014
[3]HDAC6 mRNA在食管鱗癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[D]. 張峰.泰山醫(yī)學(xué)院 2013



本文編號(hào)：2895238